Establecimiento de un método de cromatografía líquida de alta resolución para la cuantificación de proteína no enlazada en el conjugado de la vacuna SOBERANA®02

Resumen

SOBERANA®02 es una vacuna basada en la plataforma de subunidades proteicas, obtenida a partir de la conjugación química de la proteína recombinante del dominio de unión al receptor de la proteína de la espícula del coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo severo al toxoide tetánico absorbida en hidróxido de aluminio. La cuantificación de la proteína no enlazada en el conjugado constituye un atributo crítico para evaluar la efectividad del proceso de conjugación y garantizar la calidad del producto vacunal. El objetivo del trabajo fue validar un método por cromatografía líquida de alta resolución para cuantificar la proteína no enlazada, estableciendo un límite de aceptación menor del 20 %. Se utilizaron tres lotes de conjugado y se evaluaron por cromatografía de exclusión molecular en un sistema acoplado a un detector de arreglo de diodos, y una columna de Superdex 75 increase 10/300 (Cytiva). Las concentraciones se determinaron a partir de una curva de calibración con un material de referencia y se evaluaron los siguientes parámetros: idoneidad del sistema, linealidad y rango, precisión, exactitud, especificidad, límite de cuantificación y límite de detección. El coeficiente de variación al evaluar la idoneidad del sistema en términos de precisión del tiempo de retención fue 0,011 % y el factor de asimetría 1,18. Los coeficientes de variación en los ensayos de precisión intra e interensayo estuvieron dentro de los intervalos establecidos para cada uno (≤ 1 % y ≤ 5 %). La exactitud del método demostrada por los porcientos de recobro obtenidos 90 y 110 % y en todos los niveles de concentración estudiados se obtuvo un coeficiente de variación < 2 % entre los recobrados. El límite de cuantificación calculado para el método fue de 0,0129 µg/mL y el límite de detección de 0,0043 µg/mL. Los resultados obtenidos confirman la robustez del método y avalan su empleo para la cuantificación de proteína no enlazada, lo que garantiza la calidad del conjugado en las muestras de vacuna.