Utilización de la PCR cuantitativa en tiempo real como método alternativo para la evaluación de vacunas bacterianas vivas para aves de corral

Resumen

La evaluación tradicional de la potencia de las vacunas bacterianas vivas para aves de corral se basa en pruebas de desafío en animales, las cuales son laboriosas, plantean problemas éticos y están sujetas a variabilidad biológica. Este estudio evaluó la aplicación de la PCR cuantitativa en tiempo real como método alternativo in vitro para cuantificar el contenido antigénico de las vacunas bacterianas vivas para aves de corral y su correlación con la eficacia protectora. Se analizaron tres vacunas vivas atenuadas comerciales (Mycoplasma synoviae, Salmonella Enteritidis y Salmonella Typhimurium) en tres lotes de producción independientes. Las cargas antigénicas se cuantificaron mediante métodos de cultivo convencionales (unidades de cambio de color o unidades formadoras de colonias) y PCR cuantitativa en tiempo real dirigida a genes específicos de cada especie. Se administraron cinco dosis experimentales, que oscilaron entre 2 unidades logarítmicas por encima y 2 unidades logarítmicas por debajo de la dosis vacunal recomendada, a pollos libres de patógenos específicos, seguidas de un desafío homólogo. Los ensayos de PCR cuantitativa en tiempo real demostraron un excelente rendimiento analítico, incluyendo una alta linealidad (R² ≥ 0,998), eficiencias de amplificación aceptables y una estrecha concordancia con la cuantificación basada en cultivos en todas las vacunas y lotes. Se observó una clara protección dependiente de la dosis, con un mayor número de copias del genoma en la PCR cuantitativa en tiempo real asociado consistentemente con mayores tasas de protección y una correlación positiva significativa entre las cargas antigénicas y los porcentajes de protección. En conclusión, la PCR cuantitativa en tiempo real proporciona un método rápido, sensible y reproducible para cuantificar las vacunas bacterianas vivas para aves de corral, demostrando una fuerte correlación con la eficacia protectora y ofreciendo un enfoque alternativo o complementario prometedor a los ensayos de desafío in vivo, en consonancia con los principios de reducción del uso de animales.