Utilización del ácido caprílico en la obtención de inmunoglobulina G de caballo antitoxina tetánica
Resumen
Las inmunoglobulinas de caballo antitoxina tetánica purificadas, con altas concentración de anticuerpos y actividad biológica, se utilizan como sueros heterólogosy sueros estándar para la producción de la vacuna correspondiente. No obstante, la selección de agentes precipitantes para la purificación de las mismas constituye un problema en términos de pureza, rendimiento y de economía, aún por resolver. En este estudio se describieron las condiciones para el fraccionamiento de plasma antitoxina tetánica de caballo mediante precipitación con ácido caprílico. A las muestras se les añadió solución de ácido acético/acetato de sodio para alcanzar fuerzas iónicas de 0,05 a 0,4 moles/L y ácido caprílico para obtener concentraciones de 1 al 7 % (v/v), con agitación vigorosa. Las proteínas no-inmunoglobulinas precipitaron en estas condiciones, mientras que las inmunoglobulinas permanecieron en el sobrenadante. Se seleccionaron las mejores condiciones de fraccionamiento y se comparó esta metodología con la precipitación con sulfato de amonio. Los mejores resultados se obtuvieron cuando se añadió el ácido caprílico al plasma hasta alcanzar una concentración final de 3%, a una fuerza iónica de 0,2 moles/L y un pH ajustado a 4,5. La IgG antitoxina fraccionada con ácido caprílico se obtuvo con una media de recuperación de proteína de 91-95%, la concentración de proteínas fue de 27,1-29,3 mg/mL y la relación albúmina/inmunoglobulina de 0,019-0,021. Se alcanzó una pureza entre 91-95% y la actividad de antitoxina osciló entre el 93-96%.Citas
Sjostrom L, Al-Abdulla I, Rawat S, Smith D, Landon J. A comparison of ovine and equine antivenoms. Toxicon 1994;32:427-33.
Morais VM, Massaldi H. Snake antivenoms: adverse reactions and production technology. J Venom Anim Toxins Trop Dis 2009;15(1):2-18.
Wagner KS, Stickings P, White JM, Neal S, Crowcroft NS, Sesardic D, et al. A review of the international issues surrounding the availability and demand for diphtheria antitoxin for therapeutic use. Vaccine 2010;28:14-20.
Raweerith R, Ratanabanangkoon K. Fractionation of equine antivenom using caprylic acid precipitation in combination with cationic ion-exchange chromatography. J Immunol Meth 2003;282:63-72.
Steimbuch M, Audran R. The isolation of IgG from mammalian sera with the aid of caprylic acid. Arch BiochemBiophys 1969;134:279-84.
Chen S, Lau H, Brodsky Y, Kleemann GR, Latypov RF. The use of native cation-exchange chromatography to study aggregation and phase separation of monoclonal antibodies. Protein Sci 2010;19(6):1191-1204.
Guang-Ping R, Li M, Xiao-Wei H, Min-Jie M, Yong Z, Ming-Qian Z, et al. Efficient production, purification, and application of egg yolk antibodies against human HLA-A*0201 heavy chain and light chain (β2m). Protein ExprPurif 2005;44:45-51.
Theakston RDG, Warrell DA, Griffiths E. Report of a WHO workshop on the standardization and control of antivenoms. Toxicon 2003;41:541-57.
León G, Lomonte B, Gutiérrez JM. Anticomplementary activity of equine whole IgGantivenoms: comparison of three fractionation protocols. Toxicon 2005;45:123-8.
Morais V, Massaldi H. Effect of pepsin digestion on the antivenomactivity of equine immunoglobulins. Toxicon 2005;46:876-82.
Rojas G, Jiménez JM, Gutiérrez JM. Caprylic acid fractionation of hyperimmune horse plasma: description of a simple procedure for antivenom production. Toxicon 1994;32:351-63.
Nudel BC, Perdoménico C, Iácono R, Cascone O. Optimization by factorial analysis of caprylic acid precipitation of non-immunoglobulins from hyperimmune equine plasma for antivenom preparation. Toxicon 2012;59:68-73.
Morais V, Massald H. A model mechanism for protein precipitation by caprylic acid: Application to plasma puriï¬cation. BiotechnolApplBiochem 2012;59(1):50-4.
Miranda AR, Sánchez R, Góngora W, Mulet O. Obtención de sueros hiperinmunes de origen equino antitoxina tetánica, utilizando adyuvante oleoso. COCMED 2006;10(3). Disponible en: http://www.cocmed.sld.cu/no103/ n103ori8.htm
Lowry DH, Rosembroug NJ, Farr AL, Randal R. Protein measurement with foling phenol reagent. J Biol Chemical 1951;193:256-69.
Doumas BT, Watson WA, Biggs HG. Albumin Standards and the Measurement of Serum Albumin with Bromocresol Green. ClinChimActa 1971;31:87-96.
Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 1970;227(5259):680-5.
Vojdani F. Solubility. In: Methods of Testing Protein Functionality. GM Hall, ed. New York: BlackieAcademic& Professional; 1996.p.11-60.
Gutiérrez JM, Rojas E, Quesada L, León G, Núñez J, Laing GD, et al. Pan-African polyspecificantivenom produced by caprylic acid purification of horse IgG: an alternative to the antivenom crisis in Africa. Trans R Soc Trop Med Hyg 2005;99:468-75.
Wang J, Diehl T, Aguilar D, Dai XP, Arunakumari A. Precipitation of process-derived impurities in non-protein a purification schemes for antibodies. BioPharm International 2009;10(Suppl 3):4-10.
Derechos de autor 2015 Antonio Roger Miranda-Cruz, Rolando Sánchez-Artigas, Oscar Otero-Alfaro, Walter Góngora-Amores, Dailín Cobos-Valdes, Yordana Goya-Batista, Julio Balboa-González, Oliver Pérez-Martín
Esta obra está bajo licencia internacional Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-CompartirIgual 4.0.
VacciMonitor es una revista de libre acceso, bajo licencia Creative Commons. La revista permite reutilizar su contenido acorde a: https:/creativecommons.org/licenses/by/4.0/deed.es.
Concede a los autores los permisos siguientes:
-Tener la propiedad total del copyright sin restricciones.
-Distribuir copias, electrónicas o impresas, del artículo publicado entre sus estudiantes o colegas, así como permiso para que los demás miembros de su institución las utilicen con propósitos de enseñanza.
-Reutilizar parte o la totalidad del artículo en nuevos manuscritos o libros futuros.
-VacciMonitor no pone reparos en que el autor coloque su versión, o la editada por la revista, en su sitio web personal o en un repositorio de acceso abierto.
-VacciMonitor autoriza a otras casas editoriales o bases de datos a reproducir los materiales originales publicados en ella, siempre que se indique su procedencia.
