Implementación de una reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa para la detección de Mycoplasmagenitalium
Resumen
El diagnóstico de las infecciones por Mycoplasmagenitalium mediante métodos bacteriológicos tradicionales resulta laborioso y poco práctico. Es por ello que los métodos moleculares basados en la amplificación del ADN se utilizan con fines diagnósticos de infecciones causadas por este microorganismo. En Cuba no existen informes de la implementación y utilización de los métodos de reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) para la detección y cuantificación de este patógeno. En este trabajo se implementó una qPCR para la detección y cuantificación de M. genitalium mediante la amplificación de un fragmento del gen mgpB que codifica para la proteína adhesina celular, mediante la tecnología LightCycler®(Roche), utilizando los métodos de qPCRSYBR Green I y TaqMan. Se evaluó la especificidad y sensibilidad de dicha PCR utilizando ADN de M. genitalium y de otros micoplasmas de origen humanos. Se logró la implementación de ambos métodos de qPCR con un límite de detección de 3,6 geq/µL, siendo la plataforma TaqManla que mostró mejor eficiencia. Ambos métodos mostraron una alta especificidad para la detección de M. genitalium y no se detectaron reacciones cruzadas con otros micoplasmas de origen humano. Se implementó por primera vez en Cuba una qPCR para la detección de M. genitalium. El método TaqMan mostró mejor desempeño parala futura aplicación de esta metodología en muestras clínicas. El presente trabajo permitirá realizar estudios de caracterización genética y antigénica de las cepas circulantes en Cuba, útiles para conformar un inmunógenovacunal.Citas
Taylor-Robinson D, Jensen JS. Mycoplasma genitalium: from chrysalis to Multicolored Butterfly. ClinMicrobiolRev 2011;24(3):498-514.
Jensen JS. Mycoplasma genitalium the aetiological agent of urethritis and other sexually transmitted diseases. JEADV 2004;18:1-11.
Jensen JS. Mycoplasma genitalium infections. Diagnosis, clinical aspects, and pathogenesis. Dan Med Bull 2006;53:1-27.
Shipitsyna E, Savicheva A, Sokolovskiy E, Ballard RC, Domeika M, Unemo M, et al. Guidelines for the Laboratory Diagnosis of Mycoplasma genitalium Infections in East European Countries. Acta DermVenereol 2010;90:461-7.
Rodríguez N, Fernández C, Rodríguez I, Berdasquera D, Rivera-Tapia J. PCR múltiple para el diagnóstico de Mycoplasmagenitalium, Mycoplasmahominis, Ureaplasmaparvum y Ureaplasmaurealyticum. RevPeruMedExp Salud Pública 2007;24(2):152-6.
Jensen JS, Hansen HT, Lind K. Isolation of Mycoplasma genitalium strains from the male urethra. J ClinMicrobiol 1996;34(2):286-91.
Sambrook J, Fritsch EF, Maniatis T. Analysis of Genomic DNA. In: Molecular Cloning. A Laboratory Manual, second edition. New York: Cold Spring Harbor LaboratoryPress; 2000.p.445-56.
Bolske G. Survey of mycoplasma infections in cell cultures and comparison of detection methods. ZblBakteriolMicrobiolHyg AII 1988;69:331-40.
Jensen JS, Bjornelius E, Dohn B, Lidbrink P. Use of TaqMan5"™ nuclease real-time PCR for quantitative detection of Mycoplasma genitalium DNA in males with and without urethritis who were attendees at a sexually transmitted disease clinic. J ClinMicrobiol 2004;42:683-92.
Jurstrand M, Jensen JS, Fredlund H, Falk L, Molling P. Detection of Mycoplasma genitalium in urogenital specimens by real-time PCR and by conventional PCR assay. J MedMicrobiol 2005;54:23-9.
Pfaffl MW. The road from qualitative to quantitative assay: what is next? In: Bustin SA (editor). The PCR revolution. Basic technologies and amplications. Cambridge: Cambridge UniversityPress; 2010.p.110-28.
Reynisson E, Josefsen MH, Krause M, Hoorfar J. Evaluation of probe chemistries and platforms to improve the detection limit of real-time PCR. J MicrobiolMethod 2005;66(2):206-16.
TheuringerTh, Jedrysik P, Lu A, Junglass A. Real-Time PCR Brochure 07/2010. In: Critical factors for successful Real-Time PCR. Hilden: Qiagen-Sample & Assay Technologies Edition; 2010.p.1-62.
Blaylock MW, Musatovova O, Baseman JG, Baseman JB. Determination of infectious load of Mycoplasma genitalium in clinical samples of human vaginal cells. J ClinMicrobiol 2004;42(2):746-52.
Yoshida T, Deguchi T, Ito M, Maeda S, Tamaki M, Ishiko H. Quantitative detection of Mycoplasma genitalium from first-pass urine of men with urethritis and asymptomatic men by real-time PCR. J ClinMicrobiol 2002;40:1451-5.
Svenstrup HF, Jensen JS, Bjornelius E, Lidbrink P, Birkelund S, Christiansen G. Development of a Quantitative Real-Time PCR Assay for Detection of Mycoplasma genitalium. J ClinMicrobiol 2005;43(7):3121-8.
Jarquin R, Schultz J, Hanning I, Ricke SC. Development of a Real-Time Polymerase Chain Reaction assay for the simultaneous detection of Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae under industry conditions. Avian Diseases 2009;53:73-7.
Roche Applied Science. Real-Time PCR Methods. In: PCR Applications Manual. 3rd edition. Roche DiagnosticsGmbH, Mannheim: Roche AppliedScienceEdition; 2005.p.193-226.
Bacich DJ, Sobek KM, Cummings JL, Atwood AA, O"™Keefe DS. False negative results from using common PCR reagents. BMC Research Notes 2011;4:457. doi:10.1186/1756-0500-4-457
Twin J, Taylor N, Garland SM, Hocking JS, Walker J, Bradshaw CS. Comparison of two Mycoplasma genitalium real-time PCR detection methodologies. J ClinMicrobiol 2011;49(3):1140-2.
Derechos de autor 2015 Brian Arturo Mondeja-Rodríguez, Jørgen Skov-Jensen, Nadia María Rodríguez-Preval, Islay Rodríguez-González, Carmen Fernández-Molina
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