Validación de la técnica de determinación de proteínas totales por el método microcoomassie a doble longitud de onda para la muestra de producto terminado del antígeno de la nucleocápsida del virus de la hepatitis C

  • Maelys Miyares-Estrada Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
  • Joana González Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
  • Dinorah Torres-Idavoy Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
  • Lázara Muñoz Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
  • Yanelys Pestana Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
  • Sheila Padrón-Morales Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
  • Inalvis Herrera Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
  • Ileana Rosales-Torres Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
  • Marbelis Linares Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología
Palabras clave: hepatitis C, microcoomassie, validación

Resumen

En el Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología se obtuvo una formulación para un candidato vacunal del virus de la hepatitis C (VHC). Es un plásmido para la inmunización con ADN que contiene los genes de los tres antígenos estructurales del virus, mezclado con una variante truncada recombinante de la nucleocápsida del VHC como adyuvante molecular. Ambos compuestos se formularon en bulbos separados y se mezclaron en el momento de la inmunización. En el laboratorio de Desarrollo Analítica se validó la técnica de determinación de proteínas totales por el método de microcoomassie para la muestra de producto terminado (PT) del antígeno de la nucleocápsida del virus de la hepatitis C (HCcAg). Los parámetros validados fueron: especificidad, linealidad, rango, exactitud, precisión y estabilidad de la muestra de PT, bajo dos condiciones diferentes de almacenamiento. El método resultó ser específico para la cuantificación del HCcAg, sin interferencias del placebo de la muestra, a diluciones superiores a 1:8. La curva del microcoomasie fue lineal en el rango de trabajo de 5-40 µg/mL. Se demostró la exactitud del método (recuperación 100 ± 10%). En la evaluación del sistema se cumplieron los criterios de aceptación establecidos para la precisión: repetibilidad (CV £ 5%) y precisión intermedia (CV £ 10%). El PT es estable a (4 ºC y 22-25 ºC) durante los tiempos estudiados sin alteración en la concentración del HCcAg. La validación fue satisfactoria y el método fue adecuado para cuantificar proteínas en la muestra de PT. Este resultado permite dar cumplimiento a las especificaciones establecidas para este producto.

Citas

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Publicado
2015-12-08
Cómo citar
Miyares-Estrada, M., González, J., Torres-Idavoy, D., Muñoz, L., Pestana, Y., Padrón-Morales, S., Herrera, I., Rosales-Torres, I., & Linares, M. (2015). Validación de la técnica de determinación de proteínas totales por el método microcoomassie a doble longitud de onda para la muestra de producto terminado del antígeno de la nucleocápsida del virus de la hepatitis C. VacciMonitor, 22(2), 14-18. Recuperado a partir de http://vaccimonitor.finlay.edu.cu/index.php/vaccimonitor/article/view/48
Sección
Artículos Originales