Metodología para la obtención y evaluación de un extracto proteínico de una cepa autóctona de Helicobacter pylori

  • Onelkis Feliciano-Sarmiento Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kouri” (IPK)
  • Osmel Fleitas-Martínez Universidad Católica de Brasilia
  • Rosabel Falcón-Márquez Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kouri” (IPK)
  • Tatiana Almaguer-Rodríguez Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kouri” (IPK)
  • Cecia Torres-Rodríguez Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio (CENPALAB)
  • Glenda Silega-Coma Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB)
  • Yuliet Ramírez-Cintra Universidad Autónoma de Nuevo León
  • Oderay Gutierrez-Gonzalez Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kouri” (IPK)
  • Rafael Llanes-Caballero Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kouri” (IPK)

Resumen

Helicobacter pylori es una bacteria gram negativa que posee numerosos antígenos que juegan un importante papel en la patogénesis de las enfermedades gastroduodenales. Debido a la necesidad de métodos de diagnóstico estandarizados con antígenos locales u autóctonos nos propusimos el diseño de una estrategia para la obtención de extractos de antígenos con reactividad frente a sueros de pacientes infectados por H. pylori. Dos cepas de H. pylori, una autóctona (IPK196A) y una de referencia ATCC 43504, se cultivaron en un medio líquido modificado. Se sometieron a los protocolos de ruptura por ultrasonido aplicándose tres variantes de precipitación y al fraccionamiento celular mediante ultracentrifugación diferencial. Los extractos proteínicos se visualizaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida y se transfirieron para la detección de antígenos inmunorreactivos a sueros de pacientes con infección por H. pylori e individuos sanos. La variante de ultrasonido y precipitación con Coomasie fue la más efectiva para concentrar las muestras. El método de ultracentrifugación mejoró la resolución de las proteínas reactivas y permitió separarlas según su localización subcelular. El sistema de transferencia húmedo fue ideal para la inmunodetección de los antígenos obtenidos por ultrasonido mientras que el sistema semiseco permitió detectar las proteínas de membrana obtenidas por ultracentrifugación diferencial. La introducción de una metodología en el laboratorio para la obtención y evaluación de extractos proteínicos antigénicos a partir de cepas autóctonas de H. pylori, constituye la antesala para el diseño de futuros diagnosticadores y candidatos vacunales
Publicado
2018-11-28
Cómo citar
Feliciano-Sarmiento, O., Fleitas-Martínez, O., Falcón-Márquez, R., Almaguer-Rodríguez, T., Torres-Rodríguez, C., Silega-Coma, G., Ramírez-Cintra, Y., Gutierrez-Gonzalez, O., & Llanes-Caballero, R. (2018). Metodología para la obtención y evaluación de un extracto proteínico de una cepa autóctona de Helicobacter pylori. VacciMonitor, 27(3), 102-109. Recuperado a partir de http://vaccimonitor.finlay.edu.cu/index.php/vaccimonitor/article/view/206
Sección
Artículos Originales